Virus khảm thuốc lá có thể lan truyền thông qua các hạt giống bị nhiễm bệnh, cây con, cỏ dại và các bộ phận của cây đã nhiễm virus. Gió, mưa, các loài châu chấu, các động vật có vú loại nhỏ và chim chóc cũng có thể lan truyền virus từ cây này sang cây khác. Thao tác canh tác không phù hợp trong khi xử lý cây trồng cũng góp phần giúp virus phát tán. Nếu chẳng may con người hút phải thuốc là từ các cây bị nhiễm bệnh hoặc tiếp xúc bị nhiễm bệnh thì vẫn có nguy cơ bị nhiễm virus khảm thuốc lá.